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液相色谱仪LC-600B解决蜂王浆中葵烯酸的检测问题

作者： 2013-05-23 点击819

    蜂王浆是世界上公认的唯一可供人类直接服用的高活性成分的超级营养食品。
    10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)是蜂王浆中特有的一种不饱和脂肪酸，由于这种酸在自然界的其它物质中没有，只存在于蜂王浆中，所以也称为王浆酸。分离出的纯王浆酸呈白色晶体，在新鲜的蜂王浆中多以游离形式存在，性质比较稳定，具有很好的杀菌、抑菌、抗疲劳、抗衰老作用和抗癌、抗放射的功能，为此许多保健食品均添加有蜂王浆。因此作为评价蜂王浆及其制品质量优劣的主要指标之一的10-HDA含量测定显得尤其重要。至今为止，10-HDA 含量测定有薄层扫描法、分光光度法、气相法、液相法，且多见于分析蜂王浆中的10-HDA。薄层扫描法、分光光度法专属性和准确性较差，气相法处理繁琐，目前最为通用的是HPLC法。
    液相法处理简单、结果准确，本公司基于以上情况，建立了超声提取、冷藏沉淀后，用对羧基苯甲酸乙酯做内标，反相液相色谱法测定蜂王浆及其制品中10-HDA含量的方法，取得了令人满意的结果。

一、主要性能特点:
1）蜂王浆中葵烯酸检测分析液相色谱仪LC-600B整套系统由LC600B高压恒流泵：2台,SPD600B紫外检测器：1台,SCL600B系统控制器：1台,混合器：1只,7725i手动进样阀：1只,反控色谱工作站：1 套（反控主机）,液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）,微量进样器：1支（50ul/100ul）,进样支架：1只（进样阀用）等组成；安装、调试及使用都非常简单。
 
2）LC-P600高压恒流泵是微处理器智能控制的往复式双柱塞并联泵，具有工作压力高、脉动小、稳定可靠、操作方便等特点。其机械组件由电脑辅助设计，各主要零部件均在世界先进的数控加工中心制造，因此具有加工精确度高、泵体密封性能好、零件的互换性好等特点。
 
3）LC-UV600紫外检测器采用了平行的双锥孔流通池，样品池和参照池完全处于对等的条件。锥孔设计的流通池，可以在同样的池体积情况下，提高通过池孔的光能量，明显降低了仪器的静态噪音和信号漂移。
 
二、仪器主要配置和检测分析条件
LC600B高压恒流输液泵
输液方式
微体积串联双柱塞
最大输液压力
0～9999Psi
流量设定范围
0.001～9.999ml/min（以0.001
ml/min步长调节流量）
流量设定值误差
≤0.5%
流量稳定性误差
≤0.2%RSD
梯度误差
±1% （0～100%水/
丙酮水溶液2液梯度）
压力脉动
小于15Psi （流量1mL/min，
压力600～1600Psi）
泵密封性
压力为5400Psi，时间为10min，
压降小于400Psi
时间程序功能
有
尺寸
W260×H130×D420mm
重量
11kg
使用环境温度范围
4～40℃

 

SPD600B紫外可见可变波长检测器
波长范围
190nm～700nm
波长示值误差
≤±1nm
波长重复性误差
≤±0.1nm
动态噪声
≤ ±0.75×10-5AU
（甲醇，1ml/min，254nm，20℃）
静态噪音
≤ ±0.5×10-5A
空池，响应时间1秒，20℃）
动态基线漂移
≤±1×10-4AU/h
（甲醇，1ml/min,，254nm，20℃）
静态基线漂移
≤0.5×10-4
（空池，响应时间1秒，20℃）
线性范围
≥104
最小检测浓度
≤1×10-9　g/mL
（萘/甲醇溶液）
定性重复性
RSD6≤ 0.1%
定量重复性
RSD6≤ 0.5%
光谱带宽
6nm
流通池体积
8μL
光程
10mm
时间程序功能
有
尺寸
W260×H130×D420mm
重量
11kg
使用环境温度范围
4～40℃

（1）主要仪器配置
1、LC-3000高效液相色谱仪;
2、色谱柱：C18，250*4.6*10 或250*4.6*5;
3、高速离心机（大于4500r/min；50ml）;
4、超声波震荡仪;
5、涡旋混合器;
6、分析天平（万分之一）;
7、溶剂过滤器（带0.45um有机、水系过滤膜和真空泵）;
 
（2）主要试剂
1、纯净水（二次蒸馏水） 
2、甲醇：分析醇
3、乙醇：优级纯  
4、内标物：对羟基苯甲酸甲酯含量99.0%  
5、10-HAD标准品：99.0%以上。
    使用前应在放有浓硫酸的减压干燥器内减压干燥24h 6.10-HAD标准溶液：取干燥后的10-HAD标准品约25mg，精密称定，加无水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含内标物约0.65mg。7.盐酸（C=0.03mol/L）：量取0.1mol/L盐酸100ml，加入200ml重蒸馏水中。
 
（3）色谱条件
    色谱柱为Kromasil C18 柱，流动相为V(甲醇):V(水):V(磷酸)=55:45:0.2，流速1.0ml/min，对羧基苯甲酸乙酯作内标，检测波长210nm。本法简单、快速、准确，重现性好，回收率高(97.6%～101.8%)。
 
（4）样品处理
    样品解冻至室温后用玻璃棒搅匀，取约0.5g，置于已称定的50ml容量瓶中，精密称定，加0.03mol/L盐酸1ml和水2ml，置漩涡混合器上混合使样品溶解，加无水乙醇30ml，边加边轻轻摇动，再精密加入内标溶液10ml，并用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，立即置超声波中超声15min，或置漩涡混合器上振荡15min，取出，在3000r/min下离心10min后测定。如不能及时测定，应放置在冰箱中冷藏待测。
 
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