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用HP20(HP-20)大孔吸附树脂提取Mevastatin的研究
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提 供 商:
上海摩速科学器材有限公司
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资料大小:
132K
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发布时间:
2007-06-05
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浏览次数:
1988
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资料介绍
用HP20大孔吸附树脂提取Mevastatin的研究
用HP20大孔吸附树脂提取Mevastatin的研究
周鹃 印培民
摘要:报道了用HP20大孔吸附树脂从发酵液中提取Mevastatin的研究结果。HP20大孔吸附树脂每mL湿树脂对Mevastatin的吸附能力为83.8 mg 。用本方法制取的Mevastatin 纯度达95%(HPLC),完全符合用于Pravastatin的生产。
关键词:HP20大孔吸附树脂;Mevastatin;吸附
中图分类号:TQ460.6+4;R972+.6;TQ424.3 文献标识码:A
Studies on Extraction of Mevastatin by Macroreticula Adsorbent HP20
ZHOU Juan1, YIN Pei-min2
(1.Jiangxi Institute for Drug Control, Nanchang 330046, PRC;
2.Institute of Microbiology,Jiangxi Academy of Sciences, Nanchang 330029,PRC)
Abstract:This paper described the method of recovery of Mevastatin from fermentation liquid by macroreticula adsorbent HP20.The adsorption ability of HP20 is 83.8 mg Mevastatin/ml resin.The purity of Mevastatin produced by this method is detected as 95% with HPLC.This technic is highly suitable for using as the raw material for Pravastatin production.
Key words:Macroreticula adsorbent HP20;Mevastatin;Adsorption
羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-GoA)抑制剂Pravastatin Na是治疗由高血脂引起的心血管疾病的最新一代治疗药。Pravastatin Na的生产方法为微生物二步发酵法。首先由青霉(Penicillium citrinum)从糖发酵生产Mevastatin(又名Compactin,ML-236B)。经提取精制得到的Mevastatin在NaOH作用下转化为Mevastatin Na,再由Streptomyces carbophilus等具有羟基化酶活性的微生物发酵转化为Pravastatin Na[1,2]。
关于从发酵液中提取精制Mevastatin的方法,有专利报道:有机溶媒萃取结合各种层析技术[3,4],但未见其它论文公开报道。我们通过实验选出了HP20大孔吸附树脂,它具有非常优良的对Mevastatin的吸附性能,所构建的提取精制工艺简单、高效,极具工业应用价值。
1 材料和方法
1.1 吸附树脂
HP20(Diaion),使用前按常规处理。
1.2 Mevastatin发酵液
由Penicillium citrinum thom 38065发酵而得,Mevastatin的质量浓度在400 mg.L-1左右。
1.3 Mevastatin标准品
由日本静冈大学生物工学研究室提供。纯度为99%(HPLC)。
1.4 试剂
各种试剂均为化学纯或HPLC级。
1.5 Mevastatin的分析方法
Mevastatin的浓度用高压液相色谱法测定(岛津LC-10AD型)。
流动相:甲醇77%、水22.8%、醋酸0.1%、三乙胺0.1%。
流 速:1.0 mL.min-1。
分析柱:STR ODS-II,4.6 mm×150 mm(日本信和化工株式会社)。
测定波长(λ):237 nm。
测定温度:25 ℃。
测定时间:10 min (Mevastatin的保留时间为(6.5±0.2) min)。
1.6 采用动态吸附法[5]
样品被吸附后,树脂用无盐水洗涤,φ=0%~100%丙酮梯度解吸。
2 结果和讨论
2.1 Mevastatin在HP20脂树上的吸附和解吸
Mevastatin溶液在HP20树脂上的吸附曲线如图1 (Fig.1)所示。V吸附(滤液量)∶V(HP20树脂)在150∶1以内时,吸附效果最好,无Mevastatin泄漏。当该体积比大于150∶1时,Mevastatin的泄漏急剧上升。至170∶1时,树脂吸附基本完成,此后吸附量缓慢上升,至220∶1时,达吸附平衡状态。该吸附曲线表明,HP20树脂对Mevastatin有很强的吸附力,每1 mL湿树脂对Mevastatin的吸附量为83.8 mg。Mevastatin发酵液在HP20树脂上的吸附行为亦如图所示,但总吸附量由于发酵液中各种杂质的影响而有所下降。此后用无盐水洗涤吸附树脂,以除去各种无机离子、部分色素等杂质。
Mevastatin在HP20树脂上的解吸曲线如图2(Fig.2)所示。采用φ=0%~100%丙酮梯度洗脱。当丙酮在φ=0%~20%时,大量吸附在树脂上的色素被洗脱而无Mevastatin被洗脱。进一步将丙酮从φ=20%升至φ=100%时,被吸附在树脂上的Mevastatin在φ=(30%~60%)的丙酮中被集中洗脱下来。所收集的含Mevastatin的洗脱液为淡黄色,浓缩比达15倍以上。充分体现了梯度洗脱液体积小,时间短的特点。之后树脂在高体积分数的丙酮下完成清洗,用水再生后即可重新使用。
2.2 实验室提取实验
用HP20树脂从发酵液中提取精制Mevastatin的工艺如下:发酵液经过滤得滤液,滤液用2 mol.L-1 HCl调pH至7.0,进HP20树脂柱吸附。当进样量达到树脂的工作吸附容量,即检有Mevastatin漏出时,停止进样。继而用无盐水洗涤HP20树脂后,用φ=(0%~100%)丙酮梯度洗脱,收集含Mevastatin的解析液。用w=0.05%活性炭脱色后,蒸去丙酮,浓缩冻干得Mevastatin粗品。粗品用少量φ=35%的丙酮复溶后,加入3~5倍pH 2.0的蒸镏水结晶得Mevastatin。各步收率和纯度见表1(Tablel)。
Table 1 Recovery and purification of Mevastatin from
fermentation liquid of Penicillum citrinum
Step Volume/mL or
Weight/mg Conc.of Mevastatin
/mg.mL-1 Amount of
Mevastatin/mg Yield
/%
Fermentation liquid 1 200 0.385 462.0 100.0
Elution from HP20 150 2.775 416.2 90.0
Decolorization 200 1.646 329.3 79.0
Crystallization 284 95.1%(purity) 270.0 82.0
Total 58.5
3 小结
(1)在本实验的条件下,HP20树脂吸附Mevastatin,每mL湿树脂对Mevastatin的工作吸附量为78.6 mg,每mL湿树脂对Mevastatin的平衡吸附量为83.8 mg 。
(2)用本方法制得的 Mevastatin纯度为95%(HPLC),完全符合用于Pravastatin的生产。
(3)本方法过程简单,易操作,总收率为58%,较已报道的方法更适于工业化生产。
作者简介:周鹃(1966-),女,江西南昌市人,硕士,1987年7月毕业于华东理工大学生化工程系,1999年3月于日本静冈大学研究生院获硕士学位.
作者单位:周鹃(江西省药品检验所,江西南昌 330046)
印培民(江西省科学院微生物研究所,江西南昌 330029)
参考文献:
[1] HOSSOBUCHI M,SHIOIRI T,OHYAMA J, et al.Production of ML-236B,an Inhibitor of 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA Reductase by Penicillium citrinum:Improvement of strain and culture conditions [J].Biosci Biotech Bioeng,1993,57:1414~1419.
[2] 岸田有吉,内藤 敦,岩藤诚吾,等.プラバスタチンの开发研究[J].日本药学杂志,1991,111(9):469~487.
[3] 日本公开特许49-64823(1975)[P].
[4] 日本公开特许56-51992(1981)[P].
[5] 印培民,沈 卫,周 鹃:H-103大孔网状吸附剂提取林可霉素的研究[J].中国抗生素杂志,1993,18(4):310~311
021-56902220
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