杭州尔首科学仪器有限公司

饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯的测定高效液相色谱法（HPLC)       L-抗坏血酸-2-磷酸酯又名维生素C酯，本品为白色或淡黄色粉末，无臭，味微酸，它是一种维生素营养补充剂。抗坏血酸的主要功能是参与细胞间质胶原蛋白的生成，维持毛细血管的通透性，刺激肾上腺皮质素等多种激素的合成，促进抗体的形成和白细胞的噬菌能力，提高动物免疫力。在机体生物氧化过程中，起传递氢和电子的作用，并具有解毒、抗氧化、抗坏血病和抗应激的作用，并对肉毒碱的合成、叶酸变为具有活性的四氢叶酸以及肠道对铁的吸收均有促进作用。用于预防和治疗维生素C缺乏症等。促进动物对胆固醇和脂肪酸的充分利用，增强动物的免疫力，减少疾病，提高成活率和生长率。也用于重症或长期消耗性疾病及病危动物的能量补充增加抵抗力、提高机体免疫力。对体质虚弱、衰竭、消瘦、拉稀、便秘、发热、低温、皮肤红紫、苍白、贫血、黄胆、站立不稳、卧地不起、精神食欲不振及消耗性疾病有很好的辅助治疗作用， 以达到恢复体能或减少死亡率的目的。
1.试剂
   甲醇：色谱纯
   磷酸：分析纯
   磷酸二氢钾：分析纯
   四丁基硫酸氨：分析纯
   磷酸盐缓冲溶液：54g磷酸二氢钾溶于900ml水中，用磷酸调节PH=3.0后，用水稀释至1000ml
   流动相：称取6.8g磷酸二氢钾，0.5g四丁基硫酸氢铵，置于1000ml容量瓶中，加入约700ml水，待全部溶解后，加入75ml甲醇，用水定容至刻度，摇匀，过0.45um滤膜，超声脱气。
2.标准溶液的制备
  三-环己胺-抗坏血酸-2-磷酸酯标准品：纯度＞99.0%
  L-抗坏血酸-2-磷酸酯标准贮备液（以L-抗坏血酸计为100ug/ml）：准确称取标准品0.015g（标准品以L-抗坏血酸计，换算因子为0.3184），用磷酸盐缓冲溶液溶解并定容于50ml棕色容量瓶中，保存在4℃冰箱中，溶液有效期为1个月。
L-抗坏血酸-2-磷酸酯标准工作液：分别移取L-抗坏血酸-2-磷酸酯标准贮备液0.50ml，1.00ml，2.00ml，5.00ml，10.0ml置于50ml棕色容量瓶中，用磷酸盐缓冲溶液定容，即以L-抗坏血酸计浓度为1.00ug/ml，2.00ug/ml，4.00ug/ml，10.0ug/ml，20.0ug/ml标准工作液，当日配置。
3.试样溶液制备
按GB/T 20195制备试样，磨碎，通过0.45mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。
4.色谱条件
  （1）色谱柱：VERTEX  C18柱4.6*550mm*5um  （2）流动相：磷酸缓冲盐溶液
  （3）流速：1.0ml/min
  （4）检测波长：250nm
  （5）进样量：20ul
  （6）温度：室温
5.仪器
   水浴超声波，高效液相色谱仪LC-10Tvp，紫外检测器SPD-10Tvp，粉碎机，离心机，真空泵，砂芯过滤装置等
6.谱图
 

来自液相色谱网:www.uhplc.cn