本文使用Venusil-AA
氨基酸分析方法包建立了
饲料中
氨基酸分析的高效液相色谱法HPLC方法，在50-1250nmol/mL的浓度范围内，18种
氨基酸具有良好的线性范围，相关系数r大于0.999，检测限约为5pmol，具有良好的重复性和稳定性，并且通过使用不同的HPLC仪器验证了该方法具有良好的耐用性。
1.仪器
高效液相色谱仪LC-10ADvp（岛津），
SPD-10Tvp（岛津）检测器实验室用样品粉碎机；样品筛: 孔径0.25mm；离心机；真空泵 ；恒温干燥箱；水解管。
2.试剂
盐酸（优级纯）；
无水醋酸钠（分析纯）；
冰醋酸（分析纯）；
乙腈（色谱纯）；
去离子水；
3.实验条件
色谱柱：
氨基酸分析专用柱（100Å，4.6mm×250mm ，5μm）
检测波长：254 nm；
柱温：40℃
流动相A：称取15.2g无水醋酸钠，加水1850mL，溶解后用冰醋酸调pH至6.5，
加乙腈140mL，混匀，用0.45µm滤膜过滤。
流动相B：80%（V/V）乙腈水溶液，
进样量：5µL
流速：1mL/min，梯度洗脱
时间（min） A% B%
0 100 0
11 93 7
13.9 88 12
14 85 15
29 66 34
32 30 70
35 0 100
42 0 100
45 100 0
60 100 0
饲料游离氨基酸含量测定样品溶液制备 准确称取适量饲料（使样品中需测定的单个氨基酸含量在5～10mg或总氨基酸含量在100-150mg范围内），置于烧杯中，加0.1 mol/L盐酸30mL，搅拌提取15 min，静置5分钟，将上清液过滤到100 mL容量瓶中，残渣加0.1 mol/L盐酸25mL,搅拌3 min，重复提取两次，再将上清液过滤到上述容量瓶中，用水冲洗滤纸上的残渣，收集滤液并加0.1mol/L盐酸定容至刻度，摇匀。
氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生 准确量取样品溶液200μL，置1.5mL塑料离心管中，准确加入20μL正亮氨酸内标溶液，混匀，加220μL 0.1mol/L盐酸溶解，加入三乙胺乙腈溶液100μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液，用0.45µm滤器过滤。另准确量取混合氨基酸标准溶液200μL，置于1.5mL塑料离心管中，准确加入20μL正亮氨酸内标溶液，混匀，加入三乙胺乙腈溶液100μL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400μL，振摇后放置10分钟，取下层溶液，用0.45µm滤器过滤。
4.谱图
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