| 黄霉素为浅褐色至褐色粉末；有特臭。饲料中黄霉素经50％的甲醇提取后，用pH6.0磷酸盐缓冲液稀释至所需浓度，反相色谱柱进行分离，SPD-10B紫外检测器检测，外标法定量。
经试验，证明本方法准适用于饲料中黄霉素的测定。
黄霉素测定仪检测饲料添加剂黄霉素的高效液相色谱法的步骤如下：
按GB/T 14699.1 抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。
5 试剂和溶液
5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682二级水的规定。
5.2 黄霉素对照品：纯度100％。
5.3 黄霉素储备液：精密称取黄霉素对照品适量，用甲醇配制成1mg/mL，作为标准储备溶（贮存4℃冰箱保存10天）。
5.4 黄霉素标准工作液：量取适量黄霉素储备液，用pH6.0磷酸盐缓冲液稀释成浓度为 0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50μg/mL的系列标准工作液（4℃保存7天）。
5.5 甲醇：色谱纯。
5.6 乙腈：色谱纯。
5.7 甲酸铵。
5.8 磷酸。
5.9 pH 6.0磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钾2 g与磷酸二氢钾8g，加水使溶解成1000mL，即得。
6 仪器设备
6.1 黄霉素测定仪LC-10B高效液相色谱仪 (配SPD-10B紫外检测器)。
6.2 饲料粉碎机。
6.3 分析天平，感量0.0001g，0.001g。
7 测定步骤
7.1 试样提取
称取粉碎后的饲料样品5g（精确至0.001g），加入50.0mL50％甲醇溶液提取后，过滤，滤
液用磷酸盐缓冲液pH6.0稀释至所需的适当浓度，经0.45μm滤膜过滤后供高效液相色谱仪分析。
7.2 色谱条件
色谱柱：VertceC18 柱(4.6×150mm，5μm)或性能相当的色谱柱。
流速：0.7mL/min。
检测波长：258nm。
进样量：20μL。
流动相：乙腈:0.2％甲酸铵水溶液=45:55（用10％磷酸调节至pH4.9）
7.3 上机测定
取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。
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