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IL-4的检测生物学及免疫学方法
访问量:421 发表于 2011-01-10 10:23:26
 

 

IL-4的检测生物学及免疫学方法
 
    1IL-4LPS共刺激B细胞分泌IgG1IgE的测定小鼠B淋巴细胞在LPS刺激下首先分泌IgMIgG3IgG2b。当IL-4作用于LPS刺激的B细胞时,IgMISC3IgG2b合成产物明显减少,而IgEIgCl合成产物显著地增加。在细胞培养5-6d后,收获上清,通过对IgEIgCl测定,间接了解IL-4的含量。IgE测定用放射免疫法;IgCl含量测定可采用双抗体ELISA夹心法。
 
    2、依赖株CT4S的增殖试验  CT4S细胞是依赖于IL-4,对IL-2低反应的CTLL变异株,其增殖反应3H-TdR掺人量来反映IL-4呈剂量相关。操作步骤基本同前述用CTLL-2IL-2,但应设置rIL-2对照,以进一步排除IL-2对结果的影响。
 
    CT4S细胞是一类粘附细胞,在收获细胞时,可先用025%胰酶消化。CT4S细胞虽是IL4依赖株,但待测样品中IL-2含量过高(>100UmL)IL4含量过高,均影响IL-4测定。因此在进行大批试验时,对待测样品应进行预测,以便将样品稀释至该法最敏感的检测范围之内。
 
    3、转染人IL-4受体的CTLL-2细胞测定人IL-4  由于IL-4的种属特异性,人、鼠之间没有交叉反应,故可将人IL-4受体基因转染到IL-2依赖株CTLL-2细胞系中,使这种细胞同时表达小鼠IL-2受体和人IL-4受体,因此,可常规维持在含IL-2的培养基中,并可用于检则重组人IL-4或封闭IL-2活性后的混合样品中的人IL-4活性。
 
    4、双抗体夹心ELISA法检测诱生上清IL-4含量  以免抗IL-4多克隆抗体包被反应板,以酶标抗IL-4McAb进行夹心ELISA法。与标准晶对比,可测出诱生上清中的IL-4含量,操作步骤同常规ELISA
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