怎样选择色谱柱

        现代高效液相色谱中，分离效果好坏的一个重要指标是色谱填的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，因此，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

一. 硅胶基质填料

1·正相色谱

       正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团，如(NH2，APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。

        由于硅胶表面的硅轻基(SiOH)或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组份的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

         正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如:正己烷(Hexane)、氯仿(Choroform)、二氯甲烷 (Methylene Cloride)等。

2，反相色谱

         反相色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

         反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲掖与甲醇、乙情等的混合物。

         样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。

         常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H，(Phenyl)等。

二·聚合物填料

         聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等，其主要优点是在pH值为1一14均可使用。

         相对于硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。

         现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。