奶粉中三聚氰胺的检测方法—赛分科技新方法

一、SPE样品预处理
对奶粉等样品的预处理可采用Sepax-UCT DBX产品（60 mg / 3 mL，产品订货号SSDBX063）。
样品的处理步骤如下：
取奶粉5 g，加入1%三氯乙酸水溶液50 mL，摇匀。再加2 %乙酸铅2 mL，超声波处理20分钟，离心分离（8000转/分）10 min，取上清液作为待测样品。
SPE步骤如下：
（1）SPE柱的活化：取Sepax-UCT DBX产品（60 mg / 3 mL，产品订货号 SSDBX063），依次用甲醇3 mL和水3 mL冲洗。
（2）上样：取上述样品溶液3 mL加入SPE柱的顶端。液滴的流速控制在1 mL/min以内。
（3）洗涤：用水3 mL和甲醇3 mL进行冲洗，抽近干。
（4）洗脱：用5 mL含5 %氨水的甲醇进行冲洗，收集洗脱液，在50℃下用氮气吹干，然后加入2 mL流动相溶解。

二、HPLC检测
在常规的三聚氰胺HPLC检测方法中，为了提高三聚氰胺在反相柱上的保留时间，常常需要在流动相中添加离子对试剂。这种方法的主要弊端是离子对试剂挥发性差，而且会抑制样品的离子化效率，因此不易实现LC与MS的联用来降低分析方法的检测限。
针对上述技术缺陷，赛分科技基于HILIC和阳离子交换分离机理，开发了新的三聚氰胺HPLC分析方法。在新的HPLC体系中，三聚氰胺在色谱柱上具有适中的保留。而且，由于流动相为含易挥发性盐的乙腈水体系，因此可以实现LC与MS的联用，从而有助于降低分析方法的检测限。
(1) HILIC方法
该方法采用赛分公司的HILIC Polar-100色谱柱（4.6 mm I.D.×250 mm，5 μm，订货号131585-4625）。
色谱条件
色谱柱：HILIC Polar-100（4.6 mm I.D.×250 mm, 5 μm）
流动相：10 mM NH4Ac: 乙腈=10: 90 (v/v)
流速：1 mL/min
进样量：10 μL
检测波长：240 nm
参考谱图如下。



 


（2）离子交换色谱法
该方法采用采用赛分公司的Sepax HP-SCX色谱柱（4.6 mm I.D.×250 mm，5 μm，订货号120365-4625）。
色谱条件
色谱柱：Sepax HP-SCX（4.6 mm I.D.×250 mm，5 μm）
流动相：10 mM NH4Ac
流速：1 mL/min
进样量：10 μL
检测波长：240 nm
参考谱图如下。在该色谱体系中，以三聚氰胺计理论塔板数每米可高达180000，如此高的柱效使其非常利于食品中三聚氰胺的测定。











（3）常规方法
针对常规的离子对色谱方法，赛分公司的Sepax GP-C8色谱柱（4.6 mm I.D.×150 mm，5 μm，订货号107084-4615）也非常适合。
a. 色谱条件I：参考中国农业部标准NY-T 1372-2007
色谱柱：Sepax GP-C8（4.6 mm I.D.×150 mm，5 μm）
缓冲液：10 mM柠檬酸，10 mM庚烷磺酸钠
流动相：缓冲液: 乙腈=90: 10 (v/v)
流速：1 mL/min
进样量：10 μL
检测波长：240 nm
参考谱图如下。其中三聚氰胺在8.8 min出峰，拖尾因子1.0，以三聚氰胺计理论塔板数每米可高达80000。

 


b. 色谱条件II：参考美国食品药品监督管理局（FDA）三聚氰胺检测方法
色谱柱：Sepax GP-C8（4.6 mm I.D.×150 mm，5 μm）
缓冲液：10 mM柠檬酸，10 mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0
流动相：缓冲液: 乙腈=85: 15 (v/v)
流速：1 mL/min
进样量：10 μL
检测波长：240 nm
参考谱图如下。其中三聚氰胺在8.2 min出峰，拖尾因子1.0，以三聚氰胺计理论塔板数每米可高达80000。


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