色谱柱的平衡和使用

      反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇(或乙睛)/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇（或乙睛）/水互溶。由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10-20倍的体积的甲醇或乙睛平衡色谱柱：如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用含水量很高（约95%）的流动相过渡，样品分析完后，冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗，对于非极性柱，如C8或C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。另外，分析样品时，由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜，出现样品不保留而分不开，重现性差，所以对一般的C18和C8，有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙睛的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。

      平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间平衡）

色谱柱的再生

      建议用来冲洗的溶剂体积

 

色谱柱规格	柱体积	溶剂体积
150*4.6	2.50ml	50ml
250*4.6	5.0ml	100ml
250*10	20ml	400ml

 

请根据下表选择您的再生方法：

极性固定相（如Si,NH2,Diol色谱填料）的再生：正庚烷-氯仿-乙酸乙酯-丙酮-乙醇-水

非极性固定相（如反向填料C18,C8等）的再生：水-乙睛-氯仿（或异丙醇）-乙睛-水

0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱

色谱柱的维护：

        1、使用保护柱

        2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用

        3、避免流动相组成及极性有剧烈变化

        4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理

        5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净

        6、压力升高时更换保护柱

 

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