一、引言

三颗针药材为小檗科植物拟豪猪刺。小黄连刺、细叶小檗，或匙叶小檗等同属数种植物的干燥根。具有清热燥湿，泻火解毒之功效，主治湿热泻痢，黄疸，湿疹，咽痛目赤等症。其主要活性成分为盐酸小檗碱、药根碱、巴马亭等。三颗针药材是中国药典（2010 版）新增品种，对其鉴别与分析限定了严格的方法和标准。本文参照中国药典（2010 版）中规定的方法，应用RIGOL L‐3000 高效液相色谱系统分析三颗针药材中盐酸小檗碱的含量，得到了较为理想的实验结果。

二、实验部分

2.1 仪器及试剂
高效液相色谱仪：RIGOL L-3000 高效液相色谱系统（配L-3300 自动进样器）（北京普源精仪科技有限责任公司）；
超纯水纯化系统：milli-Q（美国Millipore）；
天平：BT 124S （德国塞多利斯）；
粉碎机:天津泰斯特 FW80；
酸度计：PHSJ-4A(上海雷磁)；
移液枪： 10-100 μl，100-1,000 μl(eppendorf)；
盐酸小檗碱对照品：中国药品生物制品检定所，纯度﹥98%（A0151）；
三颗针药材：市售；
其余试剂均为市售HPLC 级或分析纯。

2.2 色谱条件
色谱柱: Rigol：Compass , C18, 5 μm，4.6 x 250mm id，
柱 温：30℃；
进样量:10μL；
流动相：乙睛-0.02M磷酸二氢钾溶液（24:76）
流速: 1.0ml/min
检测波长：265 nm

2.3 试样准备

2.3.1 对照品溶液的制备
取盐酸小檗碱对照品2.0mg，精密称定，甲醇为溶剂配制浓度为20μg/mL 的溶液，备用。
2.3.2 标准溶液的制备
从标准储备液中吸取2.0,4.0,6.0,8.0,10ml 溶液到10ml 容量瓶,用甲醇稀释到刻度，备用。
2.3.3 样品溶液的制备
取三棵针药材,在粉碎机中粉碎,过4 号筛,取细粉约0.1ｇ，精密称定 ，置 50ml 容量瓶 中 ，用甲醇稀释到刻度，超声(功率300W,频率40kHz)震荡提取1h 后 ，放冷 ，用甲醇补足减失的重量,摇均,滤过,取续滤液备用 。

2.4 实验方法

2.4.1 绘制标准工作曲线
取各浓度的标准溶液，在选定的色谱条件下分别进样，进样量10μL，分别测得各浓度标准溶液的峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标, 盐酸小檗碱浓度(X)为横坐标,以浓度 X (μg/mL )对峰面积Y 进行线性回归分析,绘制标准工作曲线。
2.4.2 样品含量测试
在选定色谱条件下，将样品溶液进样1010μL，测定峰面积。

三、结果及讨论

3.1 线性范围
以盐酸小檗碱标准溶液所做的标准工作曲线如下：
 

图1 盐酸小檗碱标准曲线图

线性方程：Y=24.76X-256.6，其中相关因子为0.9999，说明该标准工作曲线具有良好线性
范围，能够充分满足样品分析的要求。

3.2 样品测试
取三颗针样品溶液，按上述色谱条件及实验方法进行高效液相色谱测定，以外标法准确计算

图2 三颗针样品实测HPLC 色谱图

表1 三颗针样品实测结果

样品来源	试样浓度（μg/mL）	盐酸小檗碱含量
市售 购于2010 年2 月	10	0.68% （药典规定不得少于0.60%）

四、结论

1.本方法中，样品溶液中的盐酸小檗碱与杂质得到了良好的分离，实验结果充分满足药典规定的方法及系统适应性要求。
2.本方法准确度高，重复性好，可见RIGOL L-3000高效液相色谱系统完全能够达到中国药典（2010版）当中对三颗针药材中盐酸小檗碱含量的测试要求。
3.结果显示，所购三颗针药材样品中盐酸小檗碱含量0.68%，满足药典要求的不低于0.60%的含量。